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作為一些酶的輔基而起輔因子作用。它以共價鍵的形式通過酰胺鍵和脫輔基酶蛋白的一個專一賴氨酰殘基的ε- 氨基相連。ε-N-生物素酰-L-賴氨酸稱為生物胞素(biocytin) (圖4[生物素作為輔基的形式])。

需要生物素的酶類能催化二氧化碳的參入 (羧化作用)或轉移，因而生物素和二氧化碳的固定密切相關。在羧化作用時還需要腺苷三磷酸(ATP)和鎂離子的存在，此外生物素在蛋白質生物合成中以及轉氨基作用中也起著重要作用。

泛酸

最初作為酵母的生長因子被分離出來。由于在生物中廣泛存在，因而被稱為泛酸。泛酸的輔酶形式是輔酶A（CoA或CoASH），是酶促乙酰化作用的輔助因子（圖5[輔酶A的結構式]），在生物學上的重要性是作為酰基的載體或供體，在代謝上尤其是脂肪酸的代謝上甚為重要。